Osteoartrit (OA) 65 yaşdan yuxarı yaşlı əhalini təsir edən uzunmüddətli xroniki degenerativ sümük oynaq xəstəliklərindən biridir.
1]. Ümumiyyətlə, OA xəstələrinə zədələnmiş qığırdaq, iltihablı sinovium və eroziyaya uğramış xondrositlər diaqnozu qoyulur ki, bu da ağrı və fiziki sıxıntıya səbəb olur.
2]. Artrit ağrıları əsasən oynaqlarda qığırdaqların iltihab nəticəsində degenerasiyası nəticəsində yaranır və qığırdaq ciddi zədələndikdə sümüklər bir-biri ilə toqquşaraq dözülməz ağrı və fiziki sıxıntıya səbəb ola bilər.
3]. Ağrı, şişlik və oynağın sərtliyi kimi simptomlarla iltihab vasitəçilərinin iştirakı yaxşı sənədləşdirilmişdir. OA olan xəstələrdə sinovial mayedə qığırdaq və subxondral sümüyün aşınmasına səbəb olan iltihablı sitokinlər aşkar edilir.
4]. OA xəstələrinin iki əsas şikayəti ağrı və sinovial iltihabdır. Buna görə də, cari OA müalicələrinin əsas məqsədləri ağrı və iltihabı azaltmaqdır. [
5]. Qeyri-steroid və steroid dərmanlar da daxil olmaqla, mövcud OA müalicələrinin ağrı və iltihabı azaltmaqda effektivliyi sübut olunsa da, bu dərmanların uzunmüddətli istifadəsi ürək-damar, mədə-bağırsaq və böyrək disfunksiyaları kimi ciddi sağlamlıq nəticələrinə malikdir.
6]. Beləliklə, osteoartritin müalicəsi üçün daha az yan təsirləri olan daha təsirli bir dərman hazırlanmalıdır.
Təbii sağlamlıq məhsulları təhlükəsiz və asan əldə olunduğu üçün getdikcə populyarlaşır [
7]. Ənənəvi Koreya dərmanları artrit də daxil olmaqla bir sıra iltihablı xəstəliklərə qarşı effektivliyini sübut etmişdir.
8]. Aucklandia lappa DC. ağrıları aradan qaldırmaq və mədəni sakitləşdirmək üçün qi dövranını artırmaq kimi müalicəvi xüsusiyyətləri ilə tanınır və ənənəvi olaraq təbii analjezik kimi istifadə olunur.
9]. Əvvəlki hesabatlar göstərir ki, A. lappa iltihab əleyhinə təsirə malikdir.
10,
11], analjezik [
12], xərçəng əleyhinə [
13] və mədə qoruyucu [
14] effektləri. A. lappa-nın müxtəlif bioloji fəaliyyətinə onun əsas aktiv birləşmələri səbəb olur: kostunolid, dehidrokostus lakton, dihidrokostunolid, kostulakton, α-kostol, saussurea lakton və kostulakton [
15]. Əvvəlki tədqiqatlar iddia edirdi ki, kostunolidin lipopolisakkariddə (LPS) antiinflamatuar xüsusiyyətlər göstərmişdir ki, bu da NF-kB və istilik şoku zülal yolunun tənzimlənməsi vasitəsilə makrofaqları induksiya etmişdir.
16,
17]. Bununla belə, heç bir tədqiqat A. lappa-nın OA müalicəsi üçün potensial fəaliyyətini araşdırmayıb. Hazırkı tədqiqatda (monosodium-yodoasetat) MİA və sirkə turşusu ilə törədilən gəmirici modellərdən istifadə etməklə A. lappa-nın OA-ya qarşı terapevtik təsirləri araşdırılmışdır.
Monosodium-yodoasetat (MIA) heyvanlarda ağrı davranışlarının çoxunu və OA-nın patofizyoloji xüsusiyyətlərini yaratmaq üçün məşhur şəkildə istifadə olunur.
18,
19,
20]. Diz oynaqlarına yeridildikdə, MİA xondrosit metabolizmasını pozur və OA-nın əsas simptomları olan qığırdaq və subxondral sümük eroziyası kimi iltihab və iltihabi simptomlara səbəb olur.
18]. Sirkə turşusu ilə yaranan qıvrılma reaksiyası, iltihablı ağrının kəmiyyətcə ölçülə bildiyi heyvanlarda periferik ağrının simulyasiyası kimi geniş qəbul edilir.
19]. Siçan makrofaq hüceyrə xətti, RAW264.7, iltihaba hüceyrə reaksiyalarını öyrənmək üçün populyar olaraq istifadə olunur. LPS ilə aktivləşdirildikdən sonra RAW264 makrofaqları iltihab yollarını aktivləşdirir və TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS və IL-6 kimi bir neçə iltihab vasitəçiləri ifraz edir.
20]. Bu tədqiqat MİA heyvan modelində, sirkə turşusu ilə induksiya edilən heyvan modelində və LPS ilə aktivləşdirilmiş RAW264.7 hüceyrələrində A. lappa-nın OA-ya qarşı anti-nosiseptiv və antiinflamatuar təsirlərini qiymətləndirmişdir.
2. Materiallar və Metodlar
2.1. Bitki materialı
A. lappa DC-nin qurudulmuş kökü. Təcrübədə istifadə edilən Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seul, Koreya) şirkətindən alınıb. O, Gachon Universitetinin Koreya Tibb Kollegiyası, Bitki Farmakologiyası Departamenti Prof. Donghun Lee tərəfindən müəyyən edilib və çek nümunəsinin nömrəsi 18060301 olaraq saxlanılıb.
2.2. A. lappa ekstraktının HPLC təhlili
A. lappa bir reflüks aparatı (distillə edilmiş su, 100 ° C-də 3 saat) istifadə edərək çıxarıldı. Çıxarılan məhlul süzülür və aşağı təzyiqli buxarlandırıcıdan istifadə edərək kondensasiya olunur. A. lappa ekstraktı -80 °C-də dondurularaq qurudulduqdan sonra 44,69% məhsuldarlığa malikdir. A. lappa-nın xromatoqrafik analizi 1260 InfinityⅡ HPLC-sistemindən (Agilent, Pal Alto, CA, ABŞ) istifadə edərək qoşulmuş HPLC ilə aparılmışdır. Xromatik ayırma üçün EclipseXDB C18 sütunu (4.6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) 35 °C-də istifadə edilmişdir. Cəmi 100 mq nümunə 10 mL 50% metanolda seyreltildi və 10 dəqiqə ərzində sonikasiya edildi. Nümunələr 0,45 μm olan şpris filtri (Waters Corp., Milford, MA, ABŞ) ilə süzüldü. Mobil faza tərkibi 0,1% fosfor turşusu (A) və asetonitril (B) idi və sütun aşağıdakı kimi yuyuldu: 0-60 dəq, 0%; 60-65 dəq, 100%; 65-67 dəq, 100%; 67-72 dəq, 0% həlledici B, axın sürəti 1,0 ml/dəq. Çirkab su 10 μL enjeksiyon həcmindən istifadə edərək 210 nm-də müşahidə edildi. Təhlil üç nüsxədə aparıldı.
2.3. Heyvanların saxlanması və idarə edilməsi
5 həftəlik erkək Sprague-Dawley (SD) siçovulları və 6 həftəlik erkək ICR siçanları Samtako Bio Koreyadan (Gyeonggi-do, Koreya) alınıb. Heyvanlar sabit temperatur (22 ± 2 °C) və rütubət (55 ± 10%) və 12/12 saat işıq/qaranlıq dövrü istifadə edərək otaqda saxlanıldı. Təcrübə başlamazdan əvvəl heyvanlar vəziyyətlə bir həftədən çox tanış olublar. Heyvanların ad libitum yem və su ehtiyatı var idi. Gachon Universitetində (GIACUC-R2019003) heyvanlara qulluq və rəftar üçün mövcud etik qaydalara bütün heyvan eksperimental prosedurlarında ciddi şəkildə əməl edilmişdir. Tədqiqat müstəntiq tərəfindən korlanmış və paralel sınaq olaraq hazırlanmışdır. Heyvanlar üzrə Eksperimental Etika Komitəsinin təlimatlarına uyğun olaraq evtanaziya metoduna əməl etdik.
2.4. MİA İnyeksiya və Müalicə
Siçovullar təsadüfi olaraq 4 qrupa, yəni sham, nəzarət, indometazin və A. lappaya ayrıldı. 2% izofluoran O2 qarışığı ilə anesteziya edilən siçovullara 50 μL MİA (40 mq/m; Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, ABŞ) intra-artikulyar olaraq diz oynaqlarına yeridildi və eksperimental OA-ya səbəb oldu. Müalicələr aşağıdakı kimi aparıldı: nəzarət və saxta qruplar yalnız AIN-93G əsas pəhriz ilə saxlanıldı. Yalnız indometazin qrupu AIN-93G pəhrizinə daxil edilmiş indometazin (3 mq/kq) ilə təmin edilmiş və A. lappa 300 mq/kq qrupu A. lappa (300 mq/kq) ilə əlavə edilmiş AIN-93G pəhrizinə təyin edilmişdir. Gündəlik olaraq 190-210 q bədən çəkisi üçün 15-17 q nisbətində OA induksiya günündən etibarən müalicələr 24 gün davam etdi.
2.5. Çəki Daşıma Ölçüsü
OA induksiyasından sonra siçovulların arxa əzalarının çəki daşıma qabiliyyətinin ölçülməsi planlaşdırılmış şəkildə qeyri-kapasitet-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, ABŞ) ilə aparıldı. Arxa əzalar üzrə çəki paylanması hesablanmışdır: çəki daşıma qabiliyyəti (%)
